生果采后真菌病害是影响生果货架期的主要身分[1-2]，收受低温、气调、减压等物理纪律不错裁减果蔬采后病害的发生，延迟保鲜技术，低温贮藏存在老本高、耗能大及冷链关节不完善等问题，况兼不成透彻根绝采前及采青年果中所含的病原真菌对生果的侵害[3]伊人成人网，因此杀菌剂成为生果采后病害防治的主要灵验妙技，而使用化学药剂进行防腐抑菌会形放胆蔬上的农残量加多，危害东说念主体健康，因此安全无毒的植物源抑菌剂确凿立行使成为现在权术的热门。

已有的权术标明丁香对微生物滋长有一定的扼制效果[4-5]， 但在生果腐臭防治中的行使权术较少。壳梭孢菌(Fusicoccum sp.)、青霉菌(Penicillium sp.)及枝孢霉菌(Cladosporium sp.)是引起果腐病及果树叶枯病的主要病原真菌，易产孢子，可随风传播，滋长速度快，是导致多种生果腐臭的致腐真菌[6-8]。本课题以实验室中保存的这三株真菌为靶标菌，权术丁香索取物对常见的生果致腐真菌扼制效果，在前期权术[4]及参考关联文件[5]的基础上，进一步明确丁香索取物对病原真菌的灵验抑菌浓度偏执抑菌机理，为后续将丁香索取物确立行使于生果的抑菌保鲜提供依据，况兼安全无毒的植物源抑菌剂的执行行使，将对绿色果蔬的可握续发展具有极其迫切的实践真谛。

1 材料与纪律 1.1 考验材料

供试菌株:壳梭孢菌(Fusicoccum sp.)、青霉菌(Penicillium sp.)、枝孢霉菌(Cladosporium sp.)从“乌龙岭”龙眼果实分离。PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)，PDB培养基(马铃薯葡萄糖液体培养基)。植物材料：丁香(Syzygium aromaticum) (供试部位为花蕾)。

1.2 考验纪律 1.2.1 丁香索取物的制备

以75%酒精为溶剂，参照文件[4]，制备100 mg · mL-1丁香酒精索取液，4 ℃下保存，备用。

1.2.2 丁香索取物抑菌效果检测

用PDA培养基将丁香索取液稀释至浓度分辨为6.250、3.125 mg · mL-1的含药平板，以不含药的PDA培养基为空缺对照，在各平板中央抛弃直径为6 mm真菌菌饼，在26 ℃恒温培养箱内培养96 h，对菌落直径进行十字形测量。抑菌率[9]打算公式为：

$ 抑菌率/\% {\rm{ }} = {\rm{ }}({d_{\rm{C}}} - {d_{\rm{T}}}) \times 100/({d_{\rm{C}}} - 6) $ (1)

式中：dC为对照菌落直径(mm)；dT为不同解决条款下的菌落直径(mm)；6是接种菌块的直径(mm)。

1.2.3 抑菌机理权术 1.2.3.1 枝孢霉菌的解决和培养

分辨将以1 mg · mL-1丁香索取物解决及以索取溶剂(1 mL 75%酒精)为空缺对照解决的1 mL 106个· mL-1孢子悬浮液进行液态培养和平板固体培养。液态培养条款为26 ℃，转速130 r · min-1，培养132 h。

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26 ℃下平板固体培养，待平板名义长满菌丝后，将菌丝刮除，用打孔器打菌块，打下来的菌块放在载玻片上伊人成人网，再将载玻片放入铺有湿润滤纸的培养皿中，26 ℃培养38 h后，不雅察孢子梗模式。

1.2.3.2 丁香索取物对枝孢霉菌细胞膜通透性的影响

称取1 g菌丝体用1 mg · mL-1丁香索取液解决，以75%酒精为空缺对照，分辨在0、15、30、45、60、75、90、105、120 min测其电导率，临了用热水热死解决10 min，再次测定的电导率为C′，考验近似3次。用C相对电导率默示细胞膜通透性，相对电导率的公式如下：

$ C_{相对电导率}/\% = \left( {C - {C_0}} \right)/({C^\prime } - {C_0}) \times 100 $ (2)

式中：C为各技术点电导率；C0为0 min时的电导率；C′为热水热死解决的电导率。

1.2.3.3 丁香索取物对枝孢霉菌菌丝总糖含量的影响

分一名取1.2.3.1解决及对照组的菌丝各0.5 g，收受蒽酮比色法测定总糖的含量[10]， 详情丁香索取物对菌丝总糖含量的影响。

1.2.3.4 丁香索取物对枝孢霉菌可溶性卵白含量的影响

分一名取1.2.3.1解决组及对照组的菌丝各0.2 g，收受考马斯亮蓝法测定可溶性卵白的含量[10]，详情丁香索取物对菌丝可溶性卵白含量的影响。

1.2.3.5 丁香索取物对枝孢霉菌产孢情况影响

将解决组及空缺对照组固体平板均置于26 ℃培养12 d后，取1 cm2的菌饼放入10 mL的试管中，加入1 mL的去离子水，制成孢子悬浮液，用血球计数板打算单元面积产孢量，考验近似3次。

$ 扼制率/\%= (解决组－空缺组) / 空缺组 \times 100 $ (3) 2 放胆与分析 2.1 丁香索取物的抑菌效果

由表 1和表 2可知，3.125和6.250 mg · mL-1丁香索取物对3种真菌均具有较好的扼制效果，浓度为6.250 mg · mL-1的丁香索取物抑菌效果比浓度为3.125 mg · mL-1较好，阐发抑菌效果与索取物浓度谈论。但不同菌对丁香索取物浓度变化的敏锐性不同，丁香索取物浓度的增大显耀提升对壳梭孢菌的扼制效果，但对枝孢霉菌和青霉菌的扼制效果变化不显然。丁香索取物对不同菌灵验的抑菌或杀菌浓度也不同，3.125 mg · mL-1丁香索取物对枝孢霉菌抑菌率达到100%，且检测菌饼直径比原本6 mm有所减小，阐发具有一定的杀菌作用，而对青霉菌及壳梭孢菌具杀菌作用的丁香索取液浓度均为6.250 mg · mL-1，因此，丁香索取物对枝孢霉菌抑菌效果相比显耀，后续的抑菌机理权术均以该菌为检测菌。

2.2 丁香索取液的抑菌机理权术 2.2.1 丁香索取液对枝孢霉菌菌丝和孢子梗模式的影响

液体培养放胆：流程1 mg · mL-1的丁香索取液解决的枝孢霉菌滋长逐渐，培养132 h后才可见枝孢霉菌菌丝长出，光学显微镜下可见菌丝模式呈现无理，菌丝分枝变多，节间被拉长、变细， 以致有出现菌丝断裂、皱缩、凹下、部分区域膨胀等甘愿；而对照组菌丝细长、粗细均匀且无膨胀和分枝增多等情况(表 3)。

固体培养放胆：26 ℃培养72 h后，解决组没长出菌丝，空缺对照组则长了绿色的菌丝；解决组培养了288 h才长满扫数这个词平板，空缺对照组只需132 h就长满了菌丝。在显微镜下不错看到解决组孢子梗孱羸纤细，容易倒伏，孢子数减少，而对照组孢子梗模式健康，孢子数多，孢子梗丛密集(表 3)。可见丁香索取物能显然扼制菌丝的滋长和养殖。

2.2.2 丁香索取液对枝孢霉菌细胞膜通透性的影响

由图 1可知，解决组和对照组的枝孢霉菌电导率具有通常的变化趋势，在0~120 min内电导率呈高涨趋势，高涨幅度显然，但解决组的枝孢霉菌电导率高涨的幅度比对照组高。真菌的细胞膜是一个迫切结构，细胞膜受到了毁伤将发扬为膜透性加多和电解质外渗速度加速，通过测定电导率不错了解真菌细胞膜通透性的变化，响应细胞受伤害的进程[11]，由此测度丁香索取液顺心了枝孢霉菌的细胞膜结构，使得电解质外渗速度加速，膜透性加多。

2.2.3 丁香索取液对枝孢霉菌总糖含量的影响

以葡萄糖含量为横坐标、以吸光度为纵坐标画图尺度弧线，得线性回来方程为y=0.002 5x-0.004 5，关谈论数为0.997 2。凭证尺度弧线可算出：1 mg · mL-1的丁香索取液解决的枝孢霉菌菌丝总糖含量为1.35%，空缺组菌丝总糖含量为10.41%，解决组总糖含量比空缺组下落了87.18%，两组各异达到极显耀水平(P < 0.01)。从以上丁香索取液对枝孢霉菌细胞膜通透性的影响推断丁香索取液顺心了细胞膜结构，导致细胞内糖的流失或因关联离子的流失覆盖了糖的合成。

2.2.4 丁香索取液对枝孢霉菌可溶性卵白含量的影响

以卵白质含量为横坐标、以吸光度为纵坐标画图的尺度弧线，拟合的线性回来方程为y=0.005x+0.018 8，关谈论数为0.996 9。由此可算出经1 mg · mL-1的丁香索取液解决的枝孢霉菌菌丝可溶性卵白含量为15.85 mg · g-1，而空缺组为5.29 mg · g-1，经分析各异达到极显耀水平(P < 0.01)。解决组可溶性卵白质含量约为对照组的3倍。

可溶性卵白是迫切的浸透搬动物资和养分物资，他们的加多和积存能提升细胞的保水能力，对细胞的生命物资及生物膜起到保护作用，是筛选生物抗性的迫切谈判。放胆显现，枝孢霉菌经丁香索取物解决后，其可溶性卵白质含量显耀加多这一甘愿可能是因为丁香索取物扼制了其可溶性卵白质的明白代谢[12]，同期亦然其对化学挟制的自我合乎和搬动，当这种挟制最初一定极限时将导致其病变或圆寂。

2.2.5 丁香索取液对枝孢霉菌产孢量的影响

以1 mg · mL-1丁香索取液解决枝孢霉菌，12 d后解决组产孢量为(4.48±0.28) ×106个· cm-2，空缺组产孢量为(1.46±0.11) ×107个· cm-2，经分析各异达到极显耀水平(P < 0.01)，产孢扼制率高达69.31% (表 4)，可见丁香索取液对枝孢霉菌产孢有较强的扼制作用。

3 论断

丁香索取物对壳梭孢菌、青霉菌及枝孢霉菌均具有抑菌效果。丁香索取物对枝孢霉菌解决组电导率高涨幅度比空缺组大，推断丁香索取物顺心细胞膜结构的完好性，使得膜通透性加大，细胞膜结构的完好性被顺心后导致里面一些迫切的离子流出，这些离子的流失可能导致一些迫切的酶失去作用，从而影响到菌体的物资代谢[12]，扼制了菌体的滋长。由此推断，丁香索取物对真菌菌丝扼制作用的系列反应可能是从顺心菌丝体的细胞膜运转，真菌细胞膜是丁香索取物的迫切作用靶位，这与前东说念主权术的植物抑菌活性物资杀菌或抑菌作用机理交流[13-15]；从养殖方面看，病原真菌能以抗逆性极强的孢子进行传播和养殖，可在果树残体、地表及泥土内越冬， 成为第二年头的侵染源[16]，病叶上的真菌是采青年果果实贮藏期真菌性病害的主要初侵染开始[17]，而丁香索取物既不错杀菌又能扼制枝孢霉菌孢子的产生，裁减或阻断病菌后代延续危害的可能[18]，可从侵染泉源扼制真菌病害的发生，这是一般化学杀菌剂难以达到的奏效。丁香是可食用的香料，因其低毒、无残留，况兼低浓度下就有显然的杀菌和抑菌作用的特点伊人成人网，既可将其径直用于生果的采后保鲜又可用于果树的田间杀菌。丁香索取物行使于生果保鲜的使用浓度应高于离体抑菌考验中的杀菌浓度，具体的喷施浓度有待于进一步权术。